27路前身为副5路，后改为27路。线路连接翠华路、雁塔路、大差市与东二环北段，是经过植物园的第一条线路，线路历史较长，客流量较大。线路由南窑村新家园始发，经翠华路、小寨东路、雁塔北路、和平路、东大街、东门、东关正街、柿园路、互助路、东二环至石家街。2014年7月30日，由辛家庙公交枢纽站缩线至石家街。 2017年3月7日，双向恢复经大差市行驶。2017年11月18日，全线配车更换为空调车。2019年1月29日，线路不再停靠雁塔西路东口、大雁塔南广场、雁引路三站。2019年1月30日至3月6日，27路末班发车时间推迟至23:00。
